Методика электрофореза препарата Карипазим

Цель исследования: обоснование возможности введения препарата Карипазим в организм человека при помощи постоянного тока. Разработка метода лечебного электрофореза препарата. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

• определить подвижность препарата Карипазим в электрическом поле;
• найти изоэлектрическую точку препарата;
• подобрать оптимальное значение pH растворителя, обеспечивающий наибольший массоперенос препарата.

Материалы и методы: В основных пробах изучали электрофоретическую подвижность препарата Карипазим (U=50W), а в контрольных пробах изучали диффузию препарата (U=0W) в камерной установке для аналитического электрофореза при значениях pH растворителя 5.0, 5.4, 5.8, 6.2, 6.6, 7.0, 7.4, 7.8, 8.2, 8.7, 9.0.

Подкисление растворителя осуществлялось при помощи HCl, а подщелачивание — 0.1 N NaOH. Определение pH растворителя производилось при помощи pH-метра. Время экспозиции в основных (электрофорез) и контрольных (диффузия) пробах 60 мин.

Концентрацию полипептидов в пробах определяли микрореакцией Lowry O.H. (*) в модификации Малахова М.Я.

Материально-техническое обеспечение: Для осуществления медицинской технологии применяются аппарата физиотерапевтические для гальванизации и электрофореза, разрешенные к применению в РФ: ЭЛФОР-проф, Элфор.

Результаты и их обсуждение: Основным действующим компонентом препарата Карипазим является протеолитический фермент растительного происхождения папаин, полученный из папайи (дынного дерева). Помимо папаина в состав препарата Карипазим входят сопутствующие ферменты сока папайи: химопапаин А, химопапаин В, лизоцин, каллаза, липаза, глютамин-трансфераза.

В медицинской практике используется лиофильно высушенный порошок препарата Карипазим в виде водного раствора. Единицы активности препарата Карипазим выражаются по классификации международной федерации фармацевтики (100 мг соответствует 350 Fip-ПЕ). Во флаконе содержится 100 мг (350 ПЕ). В картонной пачке 1 флакон.

Агрегатное состояние препарата Карипазим при комнатной температуре – твердое кристаллическое вещество.

Молекулярная масса основного компонента препарата Карипазим папаина – 23406 Д. Папаин является полипептидом, состоящим из 212 аминокислотных остатков, на N-конце молекулы которого аминокислотой является изолейцин, на C-конце – аспарагин. Хорошо растворим в воде, водных солевых растворах и в 70% метиловом и этиловом растворах. Является монотиоловой цистеиновой эндопротеазой. В отличие от пепсина, папаин активен не только в кислых, но и в нейтральных и щелочных средах (диапазон pH 3—12, оптимум pH 5-8). Он сохраняет активность в широком температурном диапазоне (до 50-60°C), обладает относительно широкой специфичностью. При pH 5-7,5 папаин расщепляет амиды, пептиды, белки и эфиры основных аминокислот с незамещенной аминогруппой.

Препарат Карипазим обладает протеолитической активностью. Расщепляет некротизированные ткани, разжижает вязкие секреты, экссудаты, сгустки крови. По действию препарат Карипазим близок к химотрипсину и трипсину.

Применяется при ожогах III-а степени в качестве средства для ускорения отторжения струпов и очищения гранулирующих ран от остатков гнойно-некротических тканей. Используется местно в виде аппликаций 0,5%, 1% или 2% растворов в зависимости от толщины струпа. Растворы готовятся ex tempore в 0,5% растворе новокаина или изотоническом растворе хлорида натрия. Салфетка, смоченная препаратом, помещается на ожоговую поверхность, закрывается влагонепроницаемой повязкой. Одновременно обрабатывают не более 30% общей поверхности тела. Повязка меняется 1 раз в сутки или 1 раз в 2 суток, при этом удаляются отслоившиеся некротические ткани. Курс лечения от 4 до 12 дней.

В.Л.Найдиным описан способ лечебного применения Карипазима в методике лечебного электрофореза для лечения больных с грыжами межпозвонковых дисков. Данная методика не имеет научного обоснования, так как автором не были представлены данные предварительных лабораторных исследований по изучению подвижности препарата в электрическом поле, работы по подбору оптимальных условий для наибольшего массопереноса препарата в электрическом поле, а также клинические испытания методики.

Папаин, а также другие биологически активные компоненты препарата Карипазим являются полипептидами. По своей биофизической природе полипептиды относятся к веществам амфолитного ряда (перемещаются в электрическом поле как в сторону анода, так и в сторону катода в зависимости от pH среды). При определенном среднем значении pH молекула полипептида остается неподвижной в электрическом поле (изоэлектрическая точка). Для эффективного введения в организм препаратов полипептидной природы необходим подбор оптимального значения pH среды, при котором обеспечивается наибольший электрогенный массоперенос лекарственного вещества в электрическом поле. Выявление оптимального значения pH среды, при котором обеспечивается наибольшая эффективность электрофореза, определяет полярность активного электрода. Пренебрежение этими принципиальными методическими установками приводит к понижению или нуллификации эффективности лечебного электрофореза.

Установлено, что минимальный массоперенос полипептидов препарата     Карипазим (условная изоэлектрическая точка) соответствует pH 8.7. При данном значении кислотности среды концентрация полипептидов в приемной камере в основных и контрольных пробах практически не отличалась.

Оптимальная полярность активного электрода положительная (в пробах с pH менее 7.0 массоперенос препарата был выше, чем в сопоставимых пробах с pH более 7.0).

Наибольшая эффективность электрофореза имеет место при слабокислой реакции среды, причем наибольший массоперенос вещества происходит при pH 5.4-5.8.

Таким образом, лабораторный этап наших исследований показал, что изоэлектрическая точка препарата Карипазим сдвинута в щелочную сторону и соответствует величине pH 8,7, наибольший массоперенос обнаруживается слабокислой реакции раствора (pH 5.4-5.8), оптимальная полярность активного электрода – анод.

Заключение: Исходя из полученных результатов, нами разработана методика лечебного электрофореза препарата Карипазим. Содержимое флакона (100 мг, т.е. 350 ПЕ) растворяется в 5 мл дистиллированной воде, подкисляется 0,1 N соляной кислотой (4-5 капель) до значения pH 5,4-5,8. Раствор наносится на лекарственную прокладку, которая помещается под гидрофильную прокладку лечебного электрода-анода. Для повышения эффективности электрофореза (увеличения количества введенного в покровы тела препарата Карипазим) в качестве растворителя может быть использован 20% димексид (4 мл дистиллированной воды в смеси с 1 мл димексида).

Электрофорез гальваническим током проводится при плотности тока 0,1-0,15 мА/см2, при этом у пациента должно возникать субъективное ощущение приятного равномерного покалывания, жжения под электродными пластинами и не должно быть дискомфортных ощущений. Время от 15 до 30 мин, увеличивается по 2 мин через процедуру. Курс 10-12 процедур (при грыжах межпозвонковых дисков — до 20 процедур), проводимых ежедневно или через день

Электрофорез синусоидальными модулированными токами (СМТ) проводится при II режиме, III и IV родом работы, при частоте модуляции 100-80 Гц, глубине модуляции 50%, а с 5-й процедуры -100%. Время — по 5-7 мин каждым родом работы, общая продолжительность процедуры 10-14 мин. Курс 10-12 процедур (при грыжах межпозвонковых дисков — до 20 процедур), проводимых ежедневно или через день.

Список литературы:

1. Кирьянова В.В. Гальванизация и лекарственный электрофорез. Нелекарственная медицина№1/2005-9с.
2. Малахов М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации. Пособие для врачей.-1995.
3. Улащик В.С. Теория и практика лекарственного электрофореза. — Минск: Беларусь.-1976 г. — 207с.
4. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent// J. Biol.Chem.-1951.-Vol. 193.-P.265-275.